⒈ 原理:
油脂受到光、熱、空氣中氧的作用,發生酸敗反應,分解出醛、酸之類的化合物。丙二醛就是分解產物的一種,它能與TBA(硫代巴比妥酸)作用生成粉紅色化合物,在538nm波長處有吸收高峰,利用此性質即能測出丙二醛含量,從而推導出油脂酸敗的程度。
⒉ 試劑:
TBA水溶液:準確稱取TBA0.288g溶于水中,并稀釋至100ml(如TBA不易溶解,可加熱至全溶澄清,然后稀釋至100ml),相當于0.02M;
三氯乙酸混合液:準確稱取三氯乙酸(分析純)7.5g及0.1gEDTA,用水溶解,稀釋至100ml;
氯仿(分析純);
丙二醛標準溶液:稱取0.315g 1,1,3,3-四乙氧基丙烷,溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當于丙二醛100ug,置于冰箱內保存。準確吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每ml相當于丙二醛10ug,備用。
⒊ 操作步驟:
⑴標準曲線的繪制
準確吸取每相當于丙二醛10ug的標準溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中,加水至總體積為5ml,加入5mlTBA溶液,然后按樣品測定步驟進行,測得光密度繪制標準曲線。
⑵樣品測定:
準確稱取融化均勻的油脂樣品5-10g,置于100ml有蓋三角瓶內,加入25ml三氯乙酸混合液,振搖半小時(保持油脂融溶狀態,如冷結即在70℃水浴上略微加熱使之融化后繼續振搖)用雙層濾紙過濾,除去油脂。濾液重復用雙層濾紙過濾一次。
準確移取上述濾液5ml置于25ml比色管內,加入5mlTBA溶液,混勻,加塞,置于90℃水浴內保溫40min,取出,冷卻1h,移入小試管內,離心5min,上清液傾入25ml納氏比色管中,加入5ml氯仿,搖勻,靜置,分層,吸出上清液于532nm波長比色,對照標準曲線得到微克數(同時做空白試驗)。
⒋ 計算
丙二醛含量(mg/kg)=
式中:C——從標準曲線查得丙二醛的微克數(ug)
m——樣品質量(g)
光密度:TBA(A532/kg)=
式中:V——油脂用三氯乙酸定容體積,ml
V1——取濾液體積,ml
V2——加TBA體積,ml